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本产品是一种通过随机引物标记反应产生生物素标记DNA探针的试剂盒。本试剂盒标记的生物素DNA探针可以用于常规的Northern、Southern、colony或plaque hybridization、dot或slot blot、原位杂交等。

本试剂盒可以用于多种DNA模板的标记，包括DNA片段、线性化的质粒或cosmid、超螺旋DNA等。用于本试剂盒的模板DNA片段应不小于100bp，小于100bp的DNA模板可以使用百奥莱博的生物素标记DNA试剂盒(TdT加尾法，货号：YT030)进行DNA探针标记。

用于本试剂盒的模板DNA的量应不少于10ng，推荐的模板用量为100ng～1μg。本试剂盒中提供了已经用生物素标记好的Biotin-Control DNA，可以用作检测生物素DNA探针标记效率的对照。生物素标记DNA可以使用百奥莱博的生物素标记核酸检测试剂盒(化学发光法，货号：YT032)或其它适当试剂盒进行检测。

• 需自备用于探针标记效率检测的相关试剂。
  
• 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 在一离心管或PCR管内加入100ng～1μg DNA模板，再加入适量试剂盒提供的Ultrapure Water，至总体积为34μL。
  说明：通常100～300ng DNA模板已经足够用于一次标记反应。
  
• 加入10μL 5×Random Primer in Buffer，混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
  
• 沸水浴加热5分钟，或在PCR仪上100℃加热5分钟(如果不能设置100℃，99℃加热5分钟也完全可以)。
  
• 立即放置到预先准备好的冰水浴中至少2～3分钟。
  
• 加入5μL Biotin-Labeling Mix。
  
• 加入1μL Klenow Fragment，混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
  
• 37℃孵育1小时或过夜(不宜超过20小时)。37℃孵育过夜可以显著增加生物素标记DNA的产量，因此推荐孵育过夜(12-20)小时。
  
• 加入3μL探针标记终止液，混匀，终止标记反应。至此标记反应已经全部完成，标记好的DNA可以-20℃保存。
  
• 此时探针可以直接用于探针标记效率的检测及Southern、Northern等后续操作。
  
• 整个探针标记反应的流程参见下表：
  

  成分	用量
  100ng-1μgDNA模板	xμl
  Ultrapure Water	(34-x)μL
  5×Random Primer in Buffer	10μL
  100℃ 5分钟，立即冰浴冷却
  Biotin-Labeling Mix	5μL
  Klenow Fragment	1μL
  总体积	50μL
  37℃孵育过夜
  探针标记终止液	3μL
  -20℃保存
  此时可用于标记效率的检测及Southern、Northern等后续检测

  
  
• 探针标记效率的检测：可以对标记好的探针进行适当梯度稀释后，使用百奥莱博的生物素标记核酸检测试剂盒(化学发光法，货号：YT032)或其它适当的方法进行检测。通常探针的标记效率可以参考下表：
  

  模板DNA量	生物素标记DNA产量
  －	孵育1小时	孵育20小时
  10ng	80ng	900ng
  30ng	150ng	1350ng
  100ng	350ng	1650ng
  300ng	750ng	2200ng
  1000ng	1300ng	2600ng
  3000ng	1600ng	2600ng

  
  注意：具体的探针标记效率还和模板DNA的长度、纯度等因素有关，上表的数值仅供参考。
  
• 使用本试剂盒所获得的生物素标记DNA的长度通常在数百bp左右。具体的长度因模板的长度而有所不同。例如模板DNA的长度为1kb，则生物素标记DNA产物的长度通常为100～1000bp，平均长度约为300bp左右。